標(biāo)準(zhǔn)類別：GB-國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，關(guān)鍵詞：飼料霉菌檢驗(yàn)方法，標(biāo)準(zhǔn)號(hào)：GB13092-91，標(biāo)準(zhǔn)名稱：飼料中霉菌檢驗(yàn)方法，標(biāo)準(zhǔn)分類：農(nóng)業(yè)飼料標(biāo)準(zhǔn)。

      1 主題內(nèi)容與適用范圍
      本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了飼料中霉菌的檢驗(yàn)方法。
      本標(biāo)準(zhǔn)適用于飼料中霉菌的檢驗(yàn)。
      2 原理
      根據(jù)霉菌生理特性，選擇適宜于霉菌生長(zhǎng)而不適宜于細(xì)菌生長(zhǎng)的培養(yǎng)基，采用平皿計(jì)數(shù)方法，測(cè)定霉菌數(shù)。
      3 設(shè)備及材料
      3.1 天平；感量1g，zui大秤量1000g。
      3.2 顯微鏡：1500×。
      3.3 溫箱：25-28±1℃ 。
      3.4 冰箱：普通冰箱。
      3.5 高壓滅菌器：2.5kg。
      3.6 干燥箱：50-250±1℃。
      3.7 水浴鍋：45-77±1℃。
      3.8 振蕩器：往復(fù)式。
      3.9 微型混合器；2900r/min。
      3.10 電爐。
      3.11 酒精燈。
      3.12 接種棒：鎳鉻絲。
      3.13 溫度計(jì)：100+1℃。
      3.14 載玻片。
      3.15 蓋玻片。
      3.16 乳缽。
      3.17 試管架。
      3.18 玻璃三角瓶：250，500mL。
      3.19 試管：15×150mm。
      3.20 平皿：直徑9cm。
      3.21 吸管：1，10mL。
      3.22 玻珠：直徑5mm。
      3.23 廣口瓶：100，500mL。
      3.24 金屬勺、刀等。
      3.25 橡皮乳頭。
      4 培養(yǎng)基和稀釋液
      4.1 高鹽察氏培養(yǎng)基。
      4.2 稀釋液。
      4.3 試驗(yàn)室常用消毒藥品。
      5 檢驗(yàn)程序
      霉菌檢驗(yàn)程序如下：
      檢樣
      |
      --------------------------
      ↓ ↓ ↓
      磨碎←--塊狀飼料 谷物飼料 粉狀飼料
      | 原料 |
      | ↓ |
      --→ 加無菌稀釋液10倍稀釋振蕩30min ←--
      ↓
      做成幾個(gè)當(dāng)倍數(shù)的稀釋液
      ↓
      選擇3個(gè)適當(dāng)稀釋度、各以1ml加入滅菌平皿內(nèi)
      ↓
      每皿加入適量高鹽察氏培養(yǎng)基
      ↓
      25-28±1℃培養(yǎng)1周
      ↓
      菌落計(jì)數(shù)
      ↓
      報(bào)告
      6 操作步驟
      6.1 采樣
      采樣時(shí)必須特別注意樣品的代表性和避免采樣時(shí)的污染。首先準(zhǔn)備好滅菌容器和采樣工具，如滅菌牛皮紙袋或廣口瓶，金屬勺和刀，在衛(wèi)生學(xué)調(diào)查基礎(chǔ)上，采取有代表性的樣品，樣品采集后應(yīng)盡快檢驗(yàn)，否則應(yīng)將樣品放在低溫干燥處。
      根據(jù)飼料倉庫、飼料垛的大小和類型，分層定點(diǎn)采樣，一般可分三層五點(diǎn)或分層隨機(jī)采樣，不同點(diǎn)的樣品，充分混合后，取500g左右送檢，小量存貯的飼料可使用金屬小勺采取上、中、下各部位的樣品混合。
      海運(yùn)進(jìn)口飼料采樣：每一船倉采取表層、上層、中層及下層四個(gè)樣品，每層從五點(diǎn)取樣混合，如船倉盛飼料超過10000t，則應(yīng)加采一個(gè)樣品。必要時(shí)采取有疑問的樣品送檢。
      6.2 以無菌操作稱取樣品25g（或25mL），放入含有225mL滅菌稀釋液的玻塞三角瓶中，置振蕩器上，振搖30min，即為1∶10的稀釋液。
      6.3
      用滅菌吸管吸取1∶10稀釋液10mL，注入帶玻璃珠的試管中，置微型混合器上混合3min，或注入試管中，另用帶橡皮乳頭的1mL滅菌吸管反復(fù)吹吸50次，使霉菌孢子分散開。
      6.4 取1mL1 10稀釋液，注入含有 9mL滅菌稀釋液試管中，另換一支吸管吹吸5次，此液為1100稀釋液。
      6.5 按上述操作順序作10倍遞增稀釋液，每稀釋一次，換用一支
      1mL滅菌吸管，根據(jù)對(duì)樣品污染情況的估計(jì)，選擇三個(gè)合適稀釋度，分別在作10倍稀釋的同時(shí)，吸取
      1mL。稀釋液于滅菌平皿中，每個(gè)稀釋度作兩個(gè)平皿，然后將涼至45℃左右的高鹽察氏培養(yǎng)基注入平皿中，充分混合，待瓊脂凝固后，倒臂于25-28±l
      溫箱中，培養(yǎng)3d后開始觀察，應(yīng)培養(yǎng)觀察一周。
      6.6 計(jì)算方法
      通常選擇菌落數(shù)在30-100個(gè)之間的平皿進(jìn)行計(jì)數(shù)，同稀釋度的2個(gè)平皿的菌落平均數(shù)乘以稀釋倍數(shù)，即為每克（或每毫升）檢樣中所含霉菌數(shù)。
      6.7 報(bào)告
      每克（或每毫升）飼料中含霉菌數(shù)以個(gè)/g（個(gè) /mL）表示。
      附 錄 A
      培養(yǎng)基和稀釋液制備
      （補(bǔ)充件）
      除特殊規(guī)定外，本標(biāo)準(zhǔn)所用化學(xué)試劑為分析純或化學(xué)純；生物制劑為細(xì)菌培養(yǎng)用；水為蒸餾水。
      A1 高鹽察氏培養(yǎng)基
      A1.1成分
      硝酸鈉（GB636）
      磷酸二氫鉀（GB1274） 1g
      硫酸鎂（MgSO4·7H20，GB671） 0.5g
      氯化鉀（GB646） 0.5g
      硫酸亞鐵（GB664） 0.01g
      氯化鈉（GB1266） 60g
      蔗糖（HG3—1001） 30g
      瓊脂 20g
      蒸餾水 1000mL
      A1.2制法
      加熱溶解，分裝后，115 高壓滅菌 30min。必要時(shí)，可酌量增加瓊脂。
      A2 稀釋液
      A2.1成分
      氯化鈉（GB1266） 8.5g
      蒸餾水 1000mL
      A2.2制法
      加熱溶解，分裝后，121 高壓滅菌30min。